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學術動態(tài)

基于酰胺化的化學標記技術在磷酸化多肽分析中的應用

鄒倫妃張啟偉肖琛熊淼鄭琦

江漢大學光電化學材料與器件教育部重點實驗室

摘要：蛋白質的翻譯后修飾復雜多樣，通過激酶與磷酸酶調控的磷酸化是最廣泛、最重要的翻譯后修飾之一。定量分析磷酸化蛋白質的動態(tài)變化，有利于闡明磷酸化修飾調控生命活動的機理，了解其在實現(xiàn)生物功能過程中的作用。以質譜為核心的分析方法是當前蛋白質翻譯后修飾研究中最常用的定量技術，主要包括無標記定量、內標絕對定量、化學標記等。本文將一種用于蛋白質糖基化分析的標記方法應用于磷酸化多肽的研究。使用二甲胺標記蛋白質的所有酶解肽段，被酰胺化的羧基可提高TiO2對磷酸化多肽的富集特異性以及液相色譜-質譜(LC-MS)檢測的靈敏度。穩(wěn)定同位素標記實驗表明，該方法適用于高通量磷酸化多肽的相對定量分析?；诙装费苌幕瘜W標記法在磷酸化多肽的質譜分析中具有優(yōu)勢，有望成為生物組織中磷酸化蛋白質研究的有力工具。

關鍵詞： 磷酸化;酰胺化;穩(wěn)定同位素標記;液相色譜-質譜(LC-MS);
基金資助： 國家自然科學基金（21976069）；江漢大學科技創(chuàng)新專項（2021KJZX002）；
專輯： 基礎科學;工程科技Ⅰ輯
專題： 生物學;化學
分類號： Q503;O657.63

鄒倫妃, 張啟偉, 肖琛, 熊淼, 鄭琦. 基于酰胺化的化學標記技術在磷酸化多肽分析中的應用[J]. 質譜學報, 2022, 43(4): 463-472.

基于酰胺化的化學標記技術在磷酸化多肽分析中的應用

鄒倫妃, 張啟偉, 肖琛, 熊淼, 鄭琦.

江漢大學光電化學材料與器件教育部重點實驗室

文章目錄
1 實驗部分
1.1 主要儀器與裝置
1.2 主要材料與試劑
1.3 實驗條件
1.3.1 色譜條件
1.3.2 質譜條件
1.4 實驗方法
1.4.1 羧基的酰胺化
1.4.2 磷酸化多肽的富集
1.4.3 穩(wěn)定同位素標記
1.4.4 數(shù)據(jù)分析
2 結果與討論
2.1 衍生原理
2.2 衍生化處理的影響
2.3 穩(wěn)定同位素標記
2.4 相對定量范圍和準確度
2.5 自縮合反應的影響

3 結論

鄒倫妃, 張啟偉, 肖琛, 熊淼, 鄭琦. 基于酰胺化的化學標記技術在磷酸化多肽分析中的應用[J]. 質譜學報, 2022, 43(4): 463-472.

基于酰胺化的化學標記技術在磷酸化多肽分析中的應用

鄒倫妃, 張啟偉, 肖琛, 熊淼, 鄭琦.

江漢大學光電化學材料與器件教育部重點實驗室

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